Qué se ve al microscopio · Fluorescencia

Qué se ve con un microscopio de fluorescencia

Una capa de células endoteliales teñida con tres colorantes fluorescentes, como la preparación comercial FluoCells n.º 1: DAPI en los núcleos, faloidina con Alexa Fluor 488 en la actina y MitoTracker Red CMXRos en las mitocondrias. Cada colorante absorbe un color de luz y emite otro, de longitud de onda más larga.

Cambie de filtro en el panel: UV, azul o verde.

100×: la capa de células

Las células endoteliales forman una capa de células planas, una junto a otra, como un empedrado. Con el filtro azul se ve su esqueleto de actina.

400×: un filtro, un colorante

Con luz UV de 365 nm brillan en azul los núcleos (DAPI). Con luz azul de 485 nm, en verde, la actina (faloidina). Con luz verde de 525 nm, en rojo, las mitocondrias (MitoTracker). El filtro de emisión deja pasar la luz que emite el colorante y corta la que lo ilumina.

1000×: filamentos y mitocondrias

Con el objetivo de inmersión se distinguen los filamentos de actina y las mitocondrias una a una. Si se deja la luz encendida, la fluorescencia se va apagando: es el fotoblanqueo.

Una célula, de cerca

El núcleo, el esqueleto de actina y las mitocondrias, cada uno con su colorante. Al microscopio se ven por separado, uno con cada filtro.

Vista en 3D: al microscopio se ve plana, desde arriba.

¿Qué microscopio de fluorescencia necesita?

Hace falta una fuente de luz de excitación y un juego de filtros para cada colorante. Los que declaran fluorescencia en su ficha llevan LED de UV, azul y verde con sus filtros.